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抗体の分析には、目的に応じて様々な分離モードが用いられます。イオン交換は表面電荷の違いに基づく分離で、チャージバリアント分析などに有効です。サイズ排除は分子サイズによって分離されるため、単量体（モノマー）と二量体、凝集体や分解物の分離に適しています。逆相分離は高分離能・高分解能で、構造解析などに用いられます。
抗ヒトモノクローナル抗体をイオン交換とサイズ排除で分離しました。サイズ排除モードでは、モノマーと凝集体が分離できました。イオン交換モードでは、アイソフォームに由来すると考えられる複数のピークが認められました。
Mouse monoclonal IgG1 anti-human IgG4 (Purified by DEAE chromatography, containing NaN3)
イオン交換
BioPro IEX QF 5 μm, 30 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 0.5 M NaCl 10-25%B (0-18 min) |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 25ºC |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 10 µL (0.1 mg/mL) |
サイズ排除
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 7.0) |
|---|---|
| Flow rate | 0.17 mL/min |
| Temperature | ambient (25ºC) |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 10 µL (0.05 mg/mL) |
IgGおよびFcフラグメントをサイズ排除と逆相で分離しました。サイズ排除モードでは、IgG全分子とフラグメントが分離できました。逆相モードでは、フラグメント中の成分のわずかな修飾の違いも高分解能で分離することができました。
Mouse IgG Fc fragment (Prepared from normal serum)
サイズ排除
YMC-Pack Diol-200 5 μm, 300 X 8.0 mmI.D.
| Eluent | 0.1 M KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.9) containing 0.2 M NaCl |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | ambient (27ºC) |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 5 µL (0.5 mg/mL) |
逆相
YMC-Pack C4 (30 nm) 5 μm, 150 X 4.6 mmI.D.
| Eluent | A) water/TFA (100/0.1) B) acetonitrile/TFA (100/0.1) 25-45%B (0-40 min) |
|---|---|
| Flow rate | 1.0 mL/min |
| Temperature | 37ºC |
| Detection | UV at 220 nm |
| Injection | 5 µL (1.0 mg/mL) |
