BioPro IEX SFと市販カラムについて、pH5.6での同一グラジエント条件でヒト化モノクローナル抗体分離を比較しています。BioPro IEX SFは市販カラムに比べて短時間で分析でき、ピークもシャープで分離も良好です。
Eluent | A) 20 mM MES-NaOH (pH 5.6) B) 20 mM MES-NaOH (pH 5.6) containing 0.2 M NaCl |
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Initial gradient conc. | 35%B (70 mM NaCl) |
Gradient slope | 0.25%B/min (0.5 mM NaCl) |
Flow rate | 180 cm/hr (0.5 mL/min for 100 X 4.6 mmI.D., 0.378 mL/min for 250 X 4.0 mmI.D.) |
Temperature | 30℃ |
Detection | UV at 280 nm |
Injection | 10 μL |
Sample | Humanized monoclonal IgG1 (1 mg/mL) |
BioPro IEX SFのロット間再現性を示しています。どの充填剤ロットでも高い分離能を有し、優れた再現性が得られています。高いロット間再現性によりバイオ医薬品の品質管理にも最適です。
Column | BioPro IEX SF 5 μm, 100 X 4.6 mmI.D. |
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Eluent | A) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) B) 20 mM NaH2PO4-Na2HPO4 (pH 6.5) containing 0.2 M NaCl 0-50%B (0.5-30 min) |
Flow rate | 0.5 mL/min (180 cm/hr) |
Temperature | 25℃ |
Detection | UV at 215 nm |
Injection | 10 μL |
Sample | monoclonal antibody (IgG1) |
ノンポーラスとポーラスカラムでタンパク質の分離を比較しています。BioPro IEXカラム ノンポーラスタイプは、基材の機械的強度に優れ、カラム効率が高いため、流速をあげた高速分析に適しています。
Eluent | A) 20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.8) B) 20 mM KH2PO4-K2HPO4 (pH 6.8) containing 0.5 M NaCl 0-100%B (0-4 min) for BioPro IEX SF 0-100%B (0-60 min) for BioPro IEX SP |
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Temperature | 25℃ |
Detection | UV at 220 nm |
Injection | 20 μL |
BioPro IEXカラム ポーラスタイプは、非特異的吸着が極めて小さい親水性ポリマーを基材としたイオン交換カラムで、タンパク質と相互作用しやすい表面構造を有しています。このためタンパク質に対して高い動的吸着容量および回収率を示します。
BSAの動的吸着容量および回収率
Dynamic binding capacity (mg/mL-resin, 10% breakthrough) |
Eluted amount (mg/mL-resin) |
Recovery* (%) |
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BioPro IEX QA | 126 | 120 | 95 |
A社 (porous Q type) | 73 | 58 | 79 |
B社 (porous Q type) | 100 | 35 | 35 |
*Recovery: (Eluted amount/Dynamic binding capacity) X 100
Breakthrough curves(破過曲線)
Column | BioPro IEX QA 50 X 4.6 mmI.D. A社 (porous Q Type) 50 X 4.6 mmI.D. B社 (porous Q Type) 50 X 5.0 mmI.D. |
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Linear velocity | 180 cm/hr |
Sample | 1 mg/mL Bovine serum albumin (BSA) in equilibration buffer |
Equilibration buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) |
Elution buffer | 20 mM Tris-HCl (pH 8.6) containing 1.0 M NaCl |
Detection | UV at 280 nm |
市販のカラムでは負荷量が少ない場合でもピーク形状が悪く分離不十分ですが、BioPro IEX QAはサンプルの負荷量を上げても良好なピーク形状を示します。このためトータル負荷量を上げてマイナーピークまで検出したい場合や、小スケールの精製を行う場合にも有効です。
大量負荷における分離能
Eluent | A) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) B) 20 mM Tris-HCl (pH 8.1) containing 0.5 M NaCl 10-80%B (0-30 min) |
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Flow rate | 0.5 mL/min |
Temperature | 25℃ |
Detection | UV at 280 nm |
Injection | 100 μL |