トリプトファンは必須アミノ酸の１つで、その代謝物は糖代謝や免疫系への関与のほか、脳神経疾患、肝疾患、腎疾患など多様な疾患と関連があることが報告されています。トリプトファンおよび代謝物の測定にはHPLCが使用されますが、これらの中には金属配位性の化合物も含まれており、ステンレス製のカラムへの吸着が懸念されます。
ここでは、バイオイナートカラムAccura Triart C18を用いて、生体試料中のトリプトファン代謝物をLC-MS/MSにて分析した事例を紹介します。
バイオイナートカラムAccura Triart C18および汎用的なステンレス製カラムYMC-Triart C18で、トリプトファン代謝物を分析しました。
Accura Triart C18は、フリットを含む接液部をバイオイナートコーティング処理したハードウェアにTriart C18を充填したカラムです。Accura Triart C18では、キノリン酸（QA）などの金属配位性化合物もシャープなピーク形状が得られ、高感度分析が可能です。
1. QA
2. PA
3. KYN
4. XA
5. KA
6. TRP
| Column | 1.9 µm, 12 nm, 50 X 2.1 mmI.D |
|---|---|
| Eluent | A) 10 mM ammonium formate–formic acid (pH 3.7) B) acetonitrile 5–50%B (0–3 min) |
| Flow rate | 0.4 mL/min |
| Temperature | 40°C |
| Detection | UV at 254 nm |
上記のUHPLC条件を応用し、魚の脳をホモジナイズして得たトリプトファン代謝物をLC-MS/MSで定量しました。Accura Triart C18を用いることで、脳組織1 mgあたりpgオーダーの高感度で検出が可能です。
| Analytes | m/z | Concentration (pg/mg tissue) |
|---|---|---|
| 1. QA | 168.20>78.15 | 49.24 |
| 2. PA | 124.15>78.15 | 51.13 |
| 3. KYN | 209.25>192.20 | 37.57 |
| 4. XA | 206.20>160.20 | 52.52 |
| 5. KA | 190.20>144.20 | 13.00 |
| 6. TRP | 205.20>188.25 | 3,092.42 |
| Column | Accura Triart C18 (1.9 µm, 12 nm), 50 X 2.1 mmI.D |
|---|---|
| Eluent | A) 10 mM ammonium formate–formic acid (pH 3.7) B) acetonitrile 5–50%B (0–4 min) |
| Flow rate | 0.3 mL/min |
| Temperature | 40°C |
| Detection | ESI positive mode |
