リサイクル分取HPLCシステムによるキラル化合物の高純度精製

分取HPLCシステムLC-Forte/Rはリサイクル機能を標準搭載しており、1回の分取では分離が困難な化合物について、カラムや移動相を変更することなく高い純度で精製することが可能です。また、多糖誘導体をキラルセレクターに持つキラル分離用カラムCHIRAL ARTは、内径30 mmまでの充填カラムをラインナップしており、分析から分取まで幅広く対応できます。
LC-Forte/RおよびCHIRAL ARTカラムを用いた、フルルビプロフェンの高純度精製例を紹介します。

フルルビプロフェンの分離（分析カラムにおける検討）

分析カラムで条件検討を行い光学分割が可能な最適条件を設定しました。設定した条件において、分取用に負荷量の検討を行いました。一般的にピークが完全分離している目安となる分離度は1.5以上になるため、分離度1.5以上となる負荷量を設定します。

最適条件設定

Column	CHIRAL ART Cellulose-C (5 µm) 250 X 4.6 mmI.D.
Eluent	n-hexane/2-propanol/TFA (95/5/0.1)
Flow rate	1.0 mL/min
Detection	UV at 254 nm
Injection	5 µL (1 mg/mL)

負荷量の検討

サンプル濃度：20 mg/mL

注入量 (µL)	負荷量 (mg)	分離度 (Rs)
5	0.1	1.8
10	0.2	1.61
13	0.26	1.53
15	0.3	1.45
20	0.4	1.31

内径30 mmカラムへのスケールアップ

単カラム分取

分析カラムで得られた結果（注入量 13 µL)より、分取カラムへスケールアップを行います。内径30 mmでは、分析カラムの断面積比倍（約45倍）の585 µL（負荷量：11.7 mg）注入することで、分析カラムと同様の分離が得られます。精製量を上げるためにはさらに負荷量を大きくする必要がありますが、その場合、現在の分離度や回収率を維持することは困難なため、リサイクル分取を検討しました。

分取クロマトグラム

分取条件

Column	CHIRAL ART Cellulose-C (5 µm) 250 X 30 mmI.D.
Eluent	n-hexane/2-propanol/TFA (95/5/0.1)
Flow rate	45 mL/min
Detection	UV at 280 nm
Injection	585 µL (20 mg/mL)

分析条件

Column	CHIRAL ART Cellulose-C (5 µm) 250 X 4.6 mmI.D.
Eluent	n-hexane/2-propanol/TFA (95/5/0.1)
Flow rate	1.0 mL/min
Detection	UV at 280 nm
Injection	5 µL